在選擇
色譜填料時，需要考慮多種因素，以下是一些主要因素：
一、純化目標和樣品特性
1.純化目標：明確純化的具體目標，如提高純度、去除雜質(zhì)、分離特定組分等。這將有助于選擇合適的填料和分離條件。
2.樣品性質(zhì)：了解待純化樣品的性質(zhì)，包括其極性、分子量、溶解性、穩(wěn)定性等。這些性質(zhì)將決定所需的填料類型和分離模式。
二、填料類型
色譜填料主要分為硅膠基質(zhì)填料、聚合物填料和其他無機填料等幾類。
1.硅膠基質(zhì)填料：
特點：硅膠是HPLC填料普遍的基質(zhì)，具有高強度和廣泛的適用性?？梢酝ㄟ^硅烷化技術(shù)鍵合各種配基，制成反相、離子交換、疏水作用、親水作用或分子排阻色譜。
適用范圍：適用于廣泛的溶劑，從極性到非極性。但需注意其在水溶性堿性流動相中的不穩(wěn)定性，一般推薦在pH 2~8范圍內(nèi)使用。
2.聚合物填料：
特點：多為聚苯乙烯-二苯或聚丙烯酸脂等，具有寬pH使用范圍（pH 1~14），且在惡劣pH條件下不會降解。相對于硅膠基質(zhì)填料，聚合物填料具有較強的疏水性，對蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效。
適用范圍：特別適用于需要高pH或溫度條件的純化過程。
3.其他無機填料：
如石墨化碳黑、氧化鋁、氧化鋯等，這些填料具有特殊的性質(zhì)，一般僅限于特殊的用途。例如，石墨化碳黑可用于分離某些幾何異構(gòu)體，氧化鋁可在高pH流動相中使用，但需注意其與堿性化合物的強相互作用。
三、填料特性
1.粒度：粒度越小，柱效越高，但背壓也越大。因此，在選擇粒度時需要在柱效和背壓之間做出平衡。目前分析分離主要用3μm和5μm填料進行。柱效提高意味著在相同條件下可以選用更短的色譜柱，從而縮短分析時間。
2.重現(xiàn)性：不同廠家或型號的填料可能表現(xiàn)出不同的選擇性，即使是同一廠家、同一牌號的填料及柱子的重現(xiàn)性有時也難以保證。因此，在選擇填料時需要考慮其重現(xiàn)性是否滿足需求。
3.穩(wěn)定性：填料的穩(wěn)定性也是選擇時需要考慮的重要因素之一。特別是在惡劣pH或溫度條件下使用時，需要選擇穩(wěn)定性好的填料以確保分離效果的一致性。
四、色譜柱參數(shù)
色譜柱的參數(shù)如內(nèi)徑、柱長、孔徑等也會對填料的選擇產(chǎn)生影響。
1.內(nèi)徑：內(nèi)徑越小，溶液在柱內(nèi)的流通路徑越短，擴散速率越高，能有效抑制峰展寬。高效液相色譜儀通常使用4.6mm和2.1mm的內(nèi)徑。
2.柱長：色譜柱的長度與理論塔板數(shù)N成正比，更長的柱長意味著更高的分離度，但運行時間也會相應延長。常用的色譜柱長度為150mm和250mm。
3.孔徑：孔徑越小，含孔量越高，比表面積和載碳量也越大，確保分子能順利進出填料孔并與孔內(nèi)表面進行分離分配。大分子使用300A孔徑，小分子則使用80~120A孔徑。
在選擇色譜填料時，需要綜合考慮純化目標、樣品特性、填料類型及其特性以及色譜柱參數(shù)等多個因素。
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